军医解读：媲美冬虫夏草的蛹虫草

    虫草素的提取技术

    1水提法

    钟艳梅等以人工蛹虫草固体培养残基为原料，采用索氏提取法提取：准确称取处理好的样品各10g，共4分，分别加入水、75%乙醇、95%乙醇、和无水乙醇做提取剂，在沸水浴中抽提8小时，收集提取液，除杂、浓缩，离子交换柱分离，收集洗脱液，分别用红紫酸胺反应定性定量鉴定虫草素的含量。发现虫草素得率分别为：0.0122%、0.0078%、0.0053%和0.0052%。

    车振明对人工蛹虫草子实体及培养基中虫草素进行提取、纯化及纯度鉴定。结果，经过对蛹虫草子实体及培养基的粉碎、石油醚脱脂、80-85℃水浴12小时、调节等电点沉淀、732-NH4离子交换树脂的分离、浓缩、4℃下低温结晶，可得到一定纯度的虫草素晶体。

    2超临界萃取法

    超临界流体萃取技术是近年来迅速发展被人们所认知，而称之为“绿色分离”的一种新型分离技术。CO2作为最常用的超临界流体，具有操作温度低、分离效率高，无毒、无溶剂残留、无二次污染等优点，较之于传统提取方法，超临界CO2萃取克服了前者提取时间长、温度高、系统开放等缺点，可同时萃取出较多的极性组分，非常适合于生物资源有效成分的提取分离。

    陈顺志以食用真菌虫草或北虫草人工培养后的发酵物为原料，采用超临界技术萃取有效成分，同时结合常规方法除去杂质、浓缩、结晶获得虫草素，并对虫草素的紫外与红外光谱特征与标准品进行了验证，表明所提取结晶纯度大于98%。

    3酶法提取

    在中药提取过程中，溶剂需要克服来自细胞壁及细胞间质的传质阻力。选用合适的酶对中药材进行预处理，能分解构成细胞壁的纤维素、半纤维素、及果胶，从而破坏细胞壁的结构，产生局部的坍塌、溶解、疏松，减少溶剂提取时来自细胞壁和细胞间质的阻力，加快有效成分溶出细胞的速率，提高提取效率，缩短提取时间。而且反应条件温和，产物不易变性，降低成本，环保节能。

    谢红旗研究UPLC测定虫草素的方法及酶法提取蛹虫草中虫草素的工艺条件。对酶种类、酶用量、酶解温度、酶解时间、酶解pH值进行考察，确定最佳提取工艺。结果，中性蛋白酶提取蛹虫草中虫草素的最佳工艺为：酶用量1.5%，酶解温度50℃，酶解pH值5.5，酶解时间60min。该工艺条件下，虫草素提取得率为0.732%，与未加酶的热水浸提相比，虫草素提取得率增加6.2倍。

    4超声法提取

    超声法提取虫草素的原理是超声波在液体中产生冲击波和射流破坏细胞和细胞膜结构，从而有助于虫草素的释放与溶出，同时超声波的热效应时水温基本保持恒定，对原料有水浴作用。因此，超声法大大缩短了提取时间，提高了虫草素的提取率和原料的利用。

    黄子琪就超破碎法用于蛹虫草菌丝体中虫草素提取时应采取的工艺条件进行研究。采用单因素分析和正交设计实验分别研究各因素对虫草素提取得率的影响。当以提取溶剂为水：乙醇（1:1，v/v）、pH=7.0、功率600W、提取时间35min的条件进行提取时，虫草素的提取得率最高。

    5微波提取法

    微波提取技术是利用频率为300-300,000MHz的电磁波辐射提取，在交频磁场、电场作用下，提取物内的极性分子取向随电场方向改变而变化，从而导致分子旋转、振动或摆动，加剧反应物分子运动及相线间的碰撞频繁率，使分子在极短时间内达到活化状态，比传统加热更均匀、高效。

    周英彪以蛹虫草固体培养残基为原料，正交试验确定微波加热提取虫草素的最佳工艺。结果，微波提取虫草素的最佳条件是微波强度P50，固液比1:20，提取时间2min，提取次数2次，微波提取液经2次制备型高效液相色谱分离纯化后虫草素纯度达到95.2%。

    夏敏对蛹虫草固体培养物中的虫草素进行微波提取，用HPLC法测定提取液中的虫草素含量，通过正交试验，确定了微波提取虫草素的最佳条件为：提取液用量10ml，固液比1:20，中火处理3min，样品中虫草素的测定值达12.16mg/g。